用正交试验法优选紫蒲痛风合剂的提取工艺，为其制备工艺、质量控制等提供理论依照。以水提浸膏收得率和绿原酸转移率为考察指标，采用正交试验法对紫蒲痛风合剂的提取工艺过程中提取料液比、提取次数、每次提取时间3个因素进行优选。经正交试验优选的紫蒲痛风合剂的提取工艺简便、可靠、重复性好，可为大生产实验提供理论依据。

  近年来，痛风的患病率呈逐年递增趋势，已成为风湿病领域的关注焦点[1]。中医药治疗痛风在辨证论治和处方用药上有着非常明显的优势，能有效减轻患者病痛，且不良反应少，价格低[2]。紫蒲痛风合剂由紫花地丁、蒲公英、野菊花、忍冬藤等中药组成，具有清热利湿、消肿止痛的功效，临床用来医治湿热蕴结型痛风。该药作为我院协定处方已应用了10余年，疗效确切，有较好的应用前景。临床使用是以汤剂形式，因药物量较大，煎煮后的药液量多，患者服用困难，不便携带，故拟开发为合剂。为了制备安全、有效、经济的紫蒲痛风合剂，我们对其药物提取工艺进行了研究，以水提浸膏收得率和绿原酸总含量为考察指标，采用正交试验来优化，为后续的大量生产提供理论依照。现报告如下。

  紫花地丁、蒲公英、野菊花、忍冬藤等由四川省中药饮片公司提供；绿原酸（中国食品药品检定研究院提供，批号：11）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

  根据该协定处方在临床应用情况和该研究的目的，选择以水为提取溶媒，对水的用量、提取次数和每次提取时间作为研究的主要影响因素，采用L9（34）正交表做试验设计。正交试验因素及水平见表 1。

  按处方比例取饮片共100 g，9份，根据L9（34）正交表安排试验[3-4]，按表 1条件加热提取，过滤，收集提取液，准确测定其体积。

  精密吸取1.3项下提取液50 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干，105℃干燥3 h，置干燥器中冷却至室温，迅速称量，得到浸膏质量。浸膏收得率=（浸膏质量/50）×药液体积/药物总质量×100%。

  ②对照品溶液的制备：取绿原酸对照品4.8 mg，精密称定，加100 mL 50%甲醇制成0.48 μg/mL的对照品溶液，备用[6]。

  ③供试品溶液的制备：精密吸取1.3项下提取液5 mL，置10 mL量瓶中，精密加入50%甲醇稀释至刻度，超声处理10 min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

  ④阴性样品溶液的制备：按处方量称取不含忍冬藤和野菊花的其余药材，按③项下供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。

  ⑤方法专属性：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μL，注入HPLC仪，按①项下色谱条件进行仔细的检测，记录色谱峰。

  ⑥标准曲线的绘制：分别精密吸取对照品溶液2、4、6、8、10 μL。按①项下色谱条件依次进样，测定其峰面积。以相应的峰面积为纵坐标，进行线]。⑦精密度试验：精密吸取混合对照品溶液10 μL，连续进样5次，测定峰面积。⑧加样回收率试验：精密吸取绿原酸对照品溶液（0.48 μg/mL）5 mL分别置于5个相同规格的10 mL容量瓶中，再分别吸取5个已知含量的供试品溶液1 mL，50%甲醇定容，按③项下方法制备加样回收率实验样品。按①项下色谱条件进行仔细的检测，记录色谱峰及峰面积，计算回收率。

  ⑨稳定性试验：精密吸取③项下供试品溶液10 μL，分别于0、2、4、6、8、12 h进样测定6次，测定峰面积。

  ⑩绿原酸转移率测定：将正交试验各试验组供试品溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过，按①项下色谱条件进行仔细的检测，分别进样10 μL，测定峰面积，计算各供试品溶液中绿原酸的含量。原药材中绿原酸含量按《中国药典》2015年版中忍冬藤和野菊花项下方法测定。绿原酸转移率=供试品中绿原酸含量/原药材中绿原酸含量×100%。

  10]，综合评分=绿原酸转移率/最高绿原酸转移率×60+浸膏收得率/最高浸膏收得率×40。根据综合评分确定最佳提取条件。1.5 提取工艺验证试验

  2.1.4 加样回收率平均绿原酸回收率为102.19%，RSD为1.86%，本方法加样回收率符合测定要求。

  平均浸膏收得率为28.12%（RSD=2.45%），绿原酸转移率为49.40%（RSD=3.22%）。验证试验结果说明优选的提取工艺合理，试验方法简便、准确。

  该处方是我院临床应用10余年的协定处方，有明确的临床疗效。按照新制剂申报相关规定，对该处方药物进行药剂学研究。该处方药物一直以水煎煮服用，故在提取条件考察时，仍以水为提取溶剂进行提取条件的考察。这样既保留了中药汤剂的特点，又可以充足表现中药的整体复方功效和调理作用，同时也避免了有机溶剂可能代入的污染和毒性，符合医院制剂实际配制的情况，便于患者的使用和接受

  选择含量测定的考察指标时，我们得知多个指标性成分均不是该处方中单味药材所含的特有成分，如含绿原酸的药材有忍冬藤和野菊花，含马钱苷的有秦艽和忍冬藤，含牡丹酚和芍药苷的有芍药和牡丹皮等

  ]，是紫蒲痛风合剂中发挥药效作用的重要成分之一。因此选用绿原酸作为筛选紫蒲痛风合剂水提最佳工艺的主要含量检测指标。目前采用HPLC法测定绿原酸含量的报道较多[

  -15]，其中以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相体系的反相液相色谱较为多见。本研究通过对含量测定方法的考察，从分离度、保留时间、理论塔板数等方面考虑，进行了流动相比例改变的考察，发现以乙腈-0.4%磷酸溶液（10:90）的分离效果较好，最终选用该流动相体系比例。在做综合评分时，由于绿原酸为本组方合剂的主要药理活性成分，本试验将其所占的权重设置较大。考虑到中药组方强调的是其复方功效，整体平衡原则、综合辨证施治和协调调理作用的结果，因而也将浸膏收得率考虑在内，所占权重比较小。正交设计方法在药学试验研究中发挥着重要的作用。分析表 2

  数据可见，不同提取工艺条件下测得绿原酸转移率为28.06%～43.89%，处方中主要药效指标在优化条件下能大大的提升近1倍，充分说明对提取工艺筛选的必要性。本研究通过对加水量、提取次数、提取时间3个因素进行考察，优化了紫蒲痛风合剂的制备工艺，按照正交试验优选的最佳工艺条件做验证试验，根据结果得出，该工艺稳定可行，浸膏收得率和绿原酸转移率均较满意，可保证制剂质量。

  综上所述，本研究采用正交试验方法对紫蒲痛风合剂的药物提取工艺进行了研究，该工艺采用水为提取溶剂，对加水量、提取次数和提取时间3个主要影响因素进行了考察，最终确定最佳提取工艺为药材8倍量的水，提取3次，每次提取30 min。在最优条件下，绿原酸转移率可达43.89%，说明此方法具有较高的可行性以及较好的应用前景为实际生产提供了一定的理论依据。

  1]。中医药治疗痛风在辨证论治和处方用药上有着非常明显的优势，能有效减轻患者病痛，且不良反应少，价格低廉

  。紫蒲痛风合剂由紫花地丁、蒲公英、野菊花、忍冬藤等中药组成，具有清热利湿、消肿止痛的功效，临床用来医治湿热蕴结型痛风。该药作为我院协定处方已应用了10余年，疗效确切，有较好的应用前景。临床使用是以汤剂形式，因药物量较大，煎煮后的药液量多，患者服用困难，不便携带，故拟开发为合剂。为了制备安全、有效、经济的紫蒲痛风合剂，我们对其药物提取工艺进行了研究，以水提浸膏收得率和绿原酸总含量为考察指标，采用正交试验来优化，为后续的大量生产提供理论依照。现报告如下。

  Waters 1525 Binary高效液相色谱（HPLC）仪（美国Waters公司），Waters 2487紫外检测仪（美国Waters公司）；XS105电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；SB3200超声波提取器（上海必能信公司）；AYJ1-0501-U超纯水机（重庆艾科浦公司）。

  紫花地丁、蒲公英、野菊花、忍冬藤等由四川省中药饮片公司提供；绿原酸（中国食品药品检定研究院提供，批号：11）；乙腈、甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。

  根据该协定处方在临床应用情况和该研究的目的，选择以水为提取溶媒，对水的用量、提取次数和每次提取时间作为研究的主要影响因素，采用L

  1.4 评价指标及其测定方法1.4.1 浸膏收得率的测定精密吸取1.3项下提取液50 mL，置已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干，105℃干燥3 h，置干燥器中冷却至室温，迅速称量，得到浸膏质量。浸膏收得率=（浸膏质量/50）×药液体积/药物总质量×100%。1.4.2 绿原酸转移率的测定

  ④阴性样品溶液的制备：按处方量称取不含忍冬藤和野菊花的其余药材，按③项下供试品溶液制备方法制备阴性样品溶液。⑤方法专属性：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10 μL，注入HPLC仪，按①项下色谱条件进行仔细的检测，记录色谱峰。

  ]。⑦精密度试验：精密吸取混合对照品溶液10 μL，连续进样5次，测定峰面积。

  ⑩绿原酸转移率测定：将正交试验各试验组供试品溶液经0.45 μm微孔滤膜滤过，按①项下色谱条件进行仔细的检测，分别进样10 μL，测定峰面积，计算各供试品溶液中绿原酸的含量。原药材中绿原酸含量按《中国药典》2015年版中忍冬藤和野菊花项下方法测定。绿原酸转移率=供试品中绿原酸含量/原药材中绿原酸含量×100%。

  正交试验设计采用正交设计软件助手Ⅱ3.1。统计学分析应用SPSS 19.0软件，组间比较采用方差分析。检验水准α=0.05。2 结果

  图 1，绿原酸的保留时间分别约为20 min，阴性对照无干扰，说明该方法专属性符合测定要求。

  2.2 正交试验及方差分析结果正交试验结果见表 2。根据综合评分结果的直观分析，极差

  ＜0.05）。故最佳工艺条件为A1B1C3，即药材加8倍水，提取3次，每次煮沸30 min。

  平均浸膏收得率为28.12%（RSD=2.45%），绿原酸转移率为49.40%（RSD=3.22%）。验证试验结果说明优选的提取工艺合理，试验方法简便、准确。

  该处方是我院临床应用10余年的协定处方，有明确的临床疗效。按照新制剂申报相关规定，对该处方药物进行药剂学研究。该处方药物一直以水煎煮服用，故在提取条件考察时，仍以水为提取溶剂进行提取条件的考察。这样既保留了中药汤剂的特点，又可以充足表现中药的整体复方功效和调理作用，同时也避免了有机溶剂可能代入的污染和毒性，符合医院制剂实际配制的情况，便于患者的使用和接受

  选择含量测定的考察指标时，我们得知多个指标性成分均不是该处方中单味药材所含的特有成分，如含绿原酸的药材有忍冬藤和野菊花，含马钱苷的有秦艽和忍冬藤，含牡丹酚和芍药苷的有芍药和牡丹皮等

  。该处方忍冬藤为君药且用量较大，加上野菊花的用量，故绿原酸含量较高。绿原酸是一种有机酸，具有抗菌、抗病毒、清除自由基和兴奋中枢神经系统等多种生物活性

  ，是紫蒲痛风合剂中发挥药效作用的重要成分之一。因此选用绿原酸作为筛选紫蒲痛风合剂水提最佳工艺的主要含量检测指标。

  ，其中以乙腈-0.4%磷酸溶液为流动相体系的反相液相色谱较为多见。本研究通过对含量测定方法的考察，从分离度、保留时间、理论塔板数等方面考虑，进行了流动相比例改变的考察，发现以乙腈-0.4%磷酸溶液（10:90）的分离效果较好，最终选用该流动相体系比例。

  在进行综合评分时，由于绿原酸为本组方合剂的主要药理活性成分，本试验将其所占的权重设置较大。考虑到中药组方强调的是其复方功效，整体平衡原则、综合辨证施治和协调调理作用的结果，因而也将浸膏收得率考虑在内，所占权重相对较小。

  正交设计方法在药学试验研究中发挥着重要的作用。分析表 2数据可见，不同提取工艺条件下测得绿原酸转移率为28.06%～43.89%，处方中主要药效指标在优化条件下能大大的提升近1倍，充分说明对提取工艺筛选的必要性。本研究通过对加水量、提取次数、提取时间3个因素进行考察，优化了紫蒲痛风合剂的制备工艺，按照正交试验优选的最佳工艺条件做验证试验，根据结果得出，该工艺稳定可行，浸膏收得率和绿原酸转移率均较满意，可保证制剂质量。综上所述，本研究采用正交试验方法对紫蒲痛风合剂的药物提取工艺进行了研究，该工艺采用水为提取溶剂，对加水量、提取次数和提取时间3个主要影响因素进行了考察，最终确定最佳提取工艺为药材8倍量的水，提取3次，每次提取30 min。在最优条件下，绿原酸转移率可达43.89%，说明此方法具有较高的可行性以及较好的应用前景为实际生产提供了一定的理论依照。